在透射电镜中,用电子束代替平行入射光束,用薄膜状的样品代替周期性结构物体,就可重复以上衍射成像过程,(2)对于透射电镜,改变中间镜的电流,使中间镜的物平面从一次像平面移向物镜的后焦面,可得到衍射谱,固定的目的主要是终止组织细胞的生化过程,同时把它们的超微结构改变控制在zui小范围内,并保护这些结构在后续的脱水、包埋等过程中不被破坏;常用双固定法,用一定浓度的戊二醛对样品预固定,漂洗后使用锇酸对样品进行后固定。
锇酸是强氧化剂,固定脂类、膜结构,有电子染色作用,3脱水,用适当的有机溶剂取代组织和细胞中的游离态水分,使之能与包埋剂混合,脱水要彻底,更换液体动作要迅速,脱水时间不宜过长,且固定后的样品要充分漂洗,4渗透、包埋与聚合,4,1渗透,2包埋与聚合,加温在60℃聚合形成固体基质,牢固地支撑整个细胞结构或组织,制成适于机械切割的固体树脂包埋块,利于切片,常用玻璃刀、钻石刀进行超薄切片,刀上要装水槽,并注入槽液。
染色方法有单染,包括铅盐单染和铀盐单染;双染色,醋酸铀染色和柠檬酸铅染色,双染色呈现结果更全面,我们一般采用的双染法进行染色,常用染色剂:醋酸铀,有微弱的放射性,主要染核酸、核蛋白、细胞核、结缔组织,柠檬酸铅,主要染膜结构、脂类、糖原等,易与CO2反应成沉淀,染色中应采取措施避免,电镜照片主要解析粒径分布、单晶/多晶、晶面结构、元素和原子分散,其本质是信号的空间分布,基本机理与比例尺地图是一致的。